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ELISA試劑盒檢測結果的不準確性
更新時(shí)間:2024-07-03   點(diǎn)擊次數:68次
  一、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫再進(jìn)行加樣操作?
 
  溫度是ELISA試劑盒結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應,實(shí)驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫,包括檢測樣本。避免因溫度的動(dòng)力學(xué)反應差異而導致ELISA試劑盒檢測結果的不準確。
 
  二、為什么實(shí)驗過(guò)程中孵育、洗滌需要振蕩?如何振蕩?
 
  振蕩孵育使反應更充分,振蕩洗滌使背景更干凈。建議使用酶標專(zhuān)用12孔微孔板振蕩器。
 
  孵育過(guò)程振蕩,可以加快、加強抗原抗體分子間的相互碰撞接觸,使得反應過(guò)程更加,OD值通常會(huì )比未振蕩孵育的結果要高;洗滌過(guò)程振蕩,可以使洗板更干凈,在很大程度這能降低背景值,同時(shí)可以提高試劑盒檢測的靈敏度。
 
  三、何時(shí)終止ELISA試劑盒反應?
 
  ELISA試劑盒實(shí)驗終需要酶催化底物顯色反應來(lái)完成,在佳時(shí)間終止反應是ELISA試劑盒實(shí)驗成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反應系統中,S9出現淡藍色,S1–S3有明顯的階梯型藍色,便需要終止反應;或者根據高濃度標準品孔在1220nm的OD值來(lái)決定,OD1220=0.-0.9之間時(shí)即可終止。
 
  四、如何獲得良好線(xiàn)性的標準曲線(xiàn)?
 
  按照推薦方式保存標準品;溶解標準品之前需短暫離心,收集粉末;確保標準品溶解和混勻(大約10min),然再進(jìn)行續的系列稀釋步驟,確保每一步都充分混勻且精確移液;顯色的恰當終止;選擇合適的數學(xué)擬合方程繪制標準曲線(xiàn)。
 
  五、ELISA試劑盒實(shí)驗為什么必須設置復孔?
 
  為獲得更準確的實(shí)驗結果,強烈建議標準品及樣本進(jìn)行復孔檢測。因為復孔檢測可以:
 
  計算平均值,確保實(shí)驗結果更準確;
 
  解決實(shí)驗中誤操作造成的跳孔現象;
 
  計算CV值,對實(shí)驗的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評估。
 
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