更新時(shí)間:2021-10-19
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成功的實(shí)驗是一個(gè)循序漸進(jìn)的過(guò)程,影響ELISA實(shí)驗結果的因素有很多,只有一一的掌握了實(shí)驗的細節,才能夠做出wan美的實(shí)驗,我司葉技術(shù)員總結ELISA試劑盒實(shí)驗失敗的原因:
一、標本的影響
溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽(yáng)性??赡苁侨苎逯泻羞^(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽(yáng)性。所以嚴重溶血標本禁用。
二、標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
三、標本保存不當
在冰箱中保存過(guò)久的標本,在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、造成假陽(yáng)性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時(shí)應輕柔,不可強烈振蕩。
四、標本凝固不全
人堿性胎兒蛋白(BFP)elisa試劑盒在工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
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